性成熟的标志是雄性睾丸和雌性的卵巢中开始具有成熟的性细胞，可以进行交配繁殖。雄 性较雌性的成熟期稍早，小型的蛇较大型的蛇成熟快。生活在北方寒冷地方的蛇，性成熟 要慢些，如极北蝰蛇雄性在第4年体长440mm〜510mm时、雌性于第5年体长550mm〜 625mm时才达到性成熟。相反，热带的蛇，由于冬眠期极短甚至无冬眠期，生长可不间断 地进行，性成熟要早些，如爪哇的棱鱗钝头蛇在第13个月达性成熟，红脖游蛇和滑鼠蛇分 别在第13个月和1年零8个月达到性成熟。浙江蝮蛇2年后达性成熟。
交配前，雄蛇主动寻觅雌蛇，称为逐偶。嗅觉在逐偶过程中起重要作用，即交配季节， 雌蛇的皮肤和尾基嗅腺分泌出一种特有的强烈气味，雄蛇可跟踪气味找到雌蛇。冬眠群居 有利于增加雌雄蛇相遇的机会。春天出蛰后，雌雄蛇往往就在冬眠场所附近进行交配，然 后才分散寻食活动。
两性相遇后，主要借嗅觉相互识别，雄性以交配器插入雌性的共泄腔进行交配，每次 交配只使用一侧的交配器。在交配季节，一条雄蛇可与若干雌蛇交配，而雌蛇只能交配1 次，故人工养蛇可以一雄数雌的比例配养。交配期除了春末夏初外，还有一次秋季交配期。 一次交配时间可延续30min至一整天不等，如蝮蛇近30min，五步蛇数小时，黑眉锦蛇11h，红点锦蛇长达20h。交配后，精子留存于雌性输卵管及共泄腔壁，待排卵时受精，开始 胚胎发育。精子在雌蛇输卵管内可存活3年〜5年。金华卫校的何时新曾把一条雌蛇单独 饲养，连续3年产仔。据国外资料，有一条美洲猫眼蛇在与雄蛇隔离6年之后还产过一批 受精卵，一条森王蛇与雄蛇隔离4年之后也还产过受精卵。
