中国蝮蛇毒抗凝组分的临床应用

蛇毒中含有抗凝组分而具抗凝活性。对蛇毒抗凝组分的研究与应用开始于本世纪60 年代。1963年Reid等人观察被马来西亚红口蝮蛇咬伤的病人时发现，病人发生严重出 血。经动物实验证实，该蛇毒能使血中纤维蛋白原明显降低甚至消失而有抗凝作用。1968 年Bell报道用已经分离纯化的马来西亚红口螺蛇蛇毒抗凝 Ancrod治疗血栓病获得抗凝效果。Ouyang等分别从尖吻蝮蛇毒和珞铁头蛇毒中纯化出 抗凝组分。1980年Sugihard等也从台湾五步蛇毒中纯化到两个抗凝血因子和A20 年代起，我国开始对蛇毒抗凝组分研究并用于临床。1978年中国科学院昆明动物研究所 首先对产于我国的尖吻蝮蛇毒进行研究并提取蛇毒酶制剂——去纤酶，福州医学院王清 川、刘广芬教授研制，福建省三明制药厂生产的蕲蛇酶，经生化、药理诸方面的研究发现与 蛇毒抗凝剂Ancrod有类似作用。继之，辽宁省蛇毒研究协作组从蛇岛黑眉蝮蛇毒中提取酶制剂 蛇岛峻蛇抗检酶（由于蛇岛蝮蛇资源有限，1981年国务院下令蛇岛为国家自然保护区，蛇岛蝮蛇抗栓酶未被批准生产）。1981年 中国人民解放军238医院与沈阳药学院合作，从东北陆生白眉蝮乌苏里亚种（蛇毒中提取酶制剂 清检酶(又名複蛇抗检酶）。

       1984年中国医科大学从浙江蝮蛇Pallas)蛇毒中提取酶制剂——江浙蝮蛇抗栓酶， 经动物毒理、药理实验及临床应用，证实有良好的抗凝疗效，用于治疗缺血性血管病等疾 病取得显著效果。

年经动物毒理、药理实验及临床应用，证实有良好的抗凝疗效,用于治疗血栓性血管 病取得显著效果。1985年中国医科大学从江浙蝮蛇Pallas)蛇毒中提取酶 制剂——江浙蝮蛇抗栓酶，但因残留神经毒较多，导致毒副作用明显，影响临床效果，后虽 然改成3号精制产品,其实际有效成分仍明显少于清栓酶。以后国内仿制药厂近百家，产 品质量良莠不齐，各省质量标准亦不一致，故卫生部药政管理局于1997年初，为统一标准 和跟国际接轨，制订了蛇毒类凝血酶品种的统一质量标准，规定名称为“降纤酶”，纯度必 须为电泳纯(即一条电泳带），这一新产品无疑是高质量的全新制剂。但从目前的生产技术 而言,因纯度要求提高而大幅度提高了生产成本，致使降纤酶的零售价比清栓酶价格高出 近百倍，而临床疗效两者并无显著差异，且降纤酶对急性血栓病疗效明显，恢复期及后遗 症效果不佳，绝大多数患者在经济上难以承受。故从国情实际出发，清栓酶(蝮蛇抗栓酶) 应为价廉物美的老产品值得保留。
 

(―)蝮蛇毒的组成及理化性质

0. 蝮蛇毒的一般特性蛇毒成分复杂，含有酶类、非酶活性蛋白质、毒素、有机物质 以及少量无机离子，具有多种多样的生理和毒理作用。除尖吻蝮蛇毒为无色液体外，一般 蝮蛇毒为淡黄色半透明液体，呈弱酸性，比重为1.03〜1.06,常温下易失活，遇高温形成 絮状沉淀。经冰冻干燥后呈结晶样颗粒或粉末，可保存很长时间。遇重金属离子、酚类和 乙醇等亦能沉淀。易被氧化剂、还原剂、强酸、强碱等破坏，亦易被蛋白水解酶所分解。

1. 蝮蛇毒中的酶类近年来，由于采用了先进的层析分离手段，许多蝮蛇毒组分得 到了纯化，从聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上分析，蝮蛇粗毒含约20条蛋白染色带。1976年， 昆明动物研究所四室测定了湖南蝮蛇毒中12种酶活性，即：蛋白水解酶、精氨酸酯酶、L- 氨基酸氧化酶、碱性磷酸单酯酶、磷酸二酯酶、5'-核苷酸酶、ATP酶、核苷焦磷酸酶、核糖 核酸酶、磷脂酶A2等。1976年上海生理研究所第一研究室蛇毒组用DEAE-纤维素分离 浙江短尾蝮蛇毒，得到5个主要蛋白峰，并对其中的神经毒组分进行了研究。对该种蛇毒 纯化的成分有:磷酸二酯酶、突触前神经毒素、碱性磷脂酶A2、酸性磷脂酶A2、类凝血酶、 激肽释放酶、舒缓激肽增强肽及突触后神经毒素等。1978年涂光俦等应用DEAE- Sephadex A-50又对浙江产蝮蛇毒分离，获得14个蛋白峰，并测定了各组分的酶活性。 1980年陈建智等用DEAE-Sephadex A-50先后对蛇岛产蝮蛇毒及长白山陆生白眉蝮蛇毒进行了柱层析分离，测得蛇岛产蝮蛇毒16个蛋白峰的致死活性、出血活性、舒缓激肽释 放活性和另外7种酶的活性。后者包括蛋白水解酶、精氨酸酯酶、碱性磷酸单酯酶、磷酸二 酯酶、核糖核酸酶、L-氨基酸氧化酶、5'-核苷酸酶等；同时还测定了长白山陆生白眉蝮蛇 毒12个蛋白峰及各组分的活性。陈氏指出，蛇岛产蝮蛇毒与浙江产蝮蛇毒等柱层析图谱 和各分离组分的生理活性分布不同。同年滕国强等人报道了皖南山区五步蛇毒用DEAE- Cellulose和DE 22柱层析分离结果，总共获得15个蛋白峰，对蛋白水解酶、精氨酸酯酶 和磷脂酶A2等酶的活力进行了测定。目前，蝮蛇毒类凝血酶及舒缓激肽释放酶等已获得 聚丙烯酰胺电泳纯的样品，许多组分的氨基酸组成也得到了测定。总的来说，蝮蛇毒中主 要含精氨酸酯酶、类凝血酶、激肽释放酶、纤溶酶、磷脂酶A2等，并以富含精氨酸酯酶，缺 少乙酰胆碱酯酶为特征。

(1) 精氨酸酯酶:属丝氨酸蛋白酶，其底物专一性强，不作用于一般蛋白质底物，只作 用于纤维蛋白原和激肽原等蛋白分子中的特定肽键。类凝血酶、激肽释放酶和纤溶酶一般 都具有精氨酸酯酶活性。

① 类凝血酶..蝮蛇毒中类凝血酶的精氨酸酯酶活力较高，它与凝血系统关系密切，已 从19种蝮亚科蛇毒中分离出类凝血酶。1981年赵忠信、夏盛强等确定了这种酶在东北长 白山陆生白眉蝮蛇毒中的活性与制备方法，同年王淳等亦从尖吻蝮蛇毒中纯化出两种类 凝血酶,滕国强（1982)从皖南尖吻蝮蛇毒中纯化出该酶，管利丰等(1982)和孙菁等(1986) 分别检测出浙江短尾蝮蛇毒和江西产蝮蛇毒中的类凝血酶的活性。绝大多数类凝血酶系 糖蛋白，大多数酶的分子量都在30 000〜40 000之间。浙江短尾蝮类凝血酶分子量 43 000,由332个氨基酸组成。尖吻蝮类凝血酶分子量为33 500,由263个氨基酸组成。所 有已纯化的蛇毒类凝血酶均富含天门冬氨酸或门冬氨酰胺和谷氨酸。蛇毒类凝血酶一般 不引起血小板聚集，不激活凝血因子V、凝血因子W及凝血因子XI。从铜头蝮及浙江蝮蛇 毒分离得到的类凝血酶作用特点是:它们首先从纤维蛋白原中释放出血纤肽B(FPB)，再 缓慢释放血纤肽A(FPA),其凝血能力很弱，所形成的凝块远不如人凝血酶所形成的凝血 块结实。由于类凝血酶不能激活XI因子，能直接作用于纤维蛋白原使之凝集，所以它在 体外起凝血作用；但在体内，由于它作用生成的纤维蛋白质凝块没有侧链交联，易被血 流冲散并进一步被纤维蛋白溶酶降解，故在临床上表现为抗凝作用。尖吻蝮蛇毒去纤酶 能降解纤维蛋白原的《-链，作用和上述类凝血酶相类似。我国目前的蝮蛇毒酶制剂去纤 酶、清栓酶、江浙蝮蛇抗栓酶均系非纯化单一的类凝血酶，它们作为抗凝剂用于临床治 疗血栓病有疗效。

② 激肽释放酶:即舒缓激肽释放酶，又称激肽原酶或通透性因子，属于丝氨酸蛋白酶， 该酶在蝮亚科蛇毒中活力较高。已经从浙江蝮蛇毒中纯化出激肽释放酶I，分子量约为 30 000,稳定性较差，它的作用是使小动脉毛细血管扩张。

③ 纤溶酶:蝮亚科蛇毒中含该组分。分离出的浙江短尾蝮蛇毒第三个精氨酸酯酶活力 峰具有纤溶活性。

(2) 蛋白水解酶:属金属蛋白酶类，其底物较广，可水解酪蛋白和变性血红蛋白等。该 酶与蛇伤后组织出血和坏死有关。

(3) 磷脂酶A2:磷脂酶A2(PLA2)选择性地水解Sn-三磷酸甘油酯2位上的酯酰键。