蛇毒的纤溶与抗凝作用

(―)纤维蛋白溶解作用

有些研究者用粗毒为材料发现蛇毒对纤维蛋白有水解作用，在这种情况下很难确定 它们的作用机制。上述作用可能有四种情况:一是蛇毒中确实含有作用于纤维蛋白的酶， 这些酶可能对纤维蛋白有特异水解作用，也可能是非特异作用;二是蛇毒中含有能够激活 纤维蛋白溶酶原的组分，由于这种组分的作用使纤维蛋白溶酶活性增加，从而加强纤维蛋 白的水解作用。应该指出的是，纤维蛋白水解活性与纤维蛋白原水解活性不同，后者作用 的对象是纤维蛋白原，使之成为不能凝固的碎片，血液经纤维蛋白原溶解酶作用后一般不 再发生凝固作用。

Ouyang等（1976)首先从尖吻蝮蛇毒(AAV)中分离纯化得到了一个纤溶酶，分子量 为24 000,等电点3. 8,它能直接作用于纤维蛋白的a(A)链(分子量70 000)专一性的裂 解为分子量分别为46 000、24 000)链，而对卩(B)链和Y链则无作用。陈以翔等 (1987)也从AAV中纯化出一个碱性纤溶酶，分子量为28 000,等电点8. 1，作用于纤维蛋 白的cKA)链。肖昌华等(1986)将AVV“溶栓酶”(内含碱性溶纤酶至3种以上成分)经实 验性动、静脉血栓形成及肺栓塞模型试验，有非常显著的抗栓、溶栓作用。

叶智彰等(1981)从蝮蛇毒中得到了 2个初步纯化的酸性纤溶酶，它既具有直接纤溶 活性，也具有激活纤溶酶活力，而且对《(A)、p(B)链都有作用。张鼎武等(1987)也从蝮蛇 毒中纯化得到一个碱性纤溶酶，分子量67 000,等电点8. 4,属于金属蛋白酶。

Ouyang 等（1976)还从恪铁头竹叶青等蛇毒中分离纯化得到了纤溶酶。其中烙铁头蛇毒中含有作用不同的2种纤溶 酶，其一同时作用于纤维蛋白的a(A)和p(A)链，另一种只作用于a(A)链。

Egen等(1987)用制备性等电聚焦电泳法从铜头蝮蛇毒中分 离出一种纤溶酶，该酶能使血凝块溶解，其作用是直接的，不是通过激活纤维蛋白溶酶原 间接起作用。

Bajwa等(1980)发现西部菱斑响尾蛇蛇毒中有纤溶组分并对它们进 行了部分的纯化，分子量测定表明该组分的分子量在60 000〜21 500之间。

Daoud等（1987 )从角蝰（Cenwto censes )蛇毒中分离出一种抗凝组分，命名为 Cemstase F-4,这种组分具有酪蛋白水解、纤维蛋白原水解和纤溶活性。紫外吸收光谱分 析表明该组分中Tyr和Try的含量很高，EW% = 0. 84。C. D谱研究表明该组分中含 23. %的0-螺旋，34%卩-折叠和32. 5%的松散结构。以酪蛋白为底物时，反应的最适pH为 10. 0，Km为1. 45g/L。Cerast^ise F-4是一种金属蛋白，每分子中含有1个Ca2+和1个 Zn2+，酶活性能被EDTA和EGTA抑制，Ca2+、Mg2+和Zn2+能部分激活酶。可以设想 Ca2+Zn2+在维持酶的结构和催化功能方面起重要作用。

除上述蛇毒外，食鱼蝮蛇毒蛇毒也有纤溶组分，它们的抗凝作用与这种组分有关。

研究资料表明，对纤溶酶的研究重点在纯化及作用部位的研究，对于活性中心及结构 与功能的研究还很少，其作用机制尚不太清楚。在应用上的进展也缓慢。尽管早就发现蛇 毒纤溶酶无抗原反应，但纯纤溶酶在临床的应用至今也未见报道。我国生产的蝮蛇抗栓 酶，它的主要成分是类凝血酶，据分析，其中也含有纤溶酶。据张鼎武等认为，蝮蛇抗栓酶 的副作用，如发热、荨麻疹等可能与纤溶酶相关。江浙蝮蛇毒、尖吻蝮蛇毒等纤溶酶大多数 具有出血活性的同时还可使血小板大辐度减少，由此可能引起自发性出血。

(二）纤维蛋白原溶解作用

有些蛇毒中含有能水解纤维蛋白原的组分，它们与类凝血酶不同，水解纤维蛋白原后 并不能引起它们的凝固，而是把它们水解成碎片，因此这类酶作用于纤维蛋白原是非特异 性的,水解的肽键与类凝血酶不同。纤维蛋白原溶解酶有些能水解A(«)链，有些能水解B (P)链，根据这种特性可以把纤维蛋白溶解酶分成二类，一类称为A-纤维蛋白原溶解酶， 另一类称为B-纤维蛋白原溶解酶，当然也有的能水解A(a)和B((3)二种链。

Ouyang等（1983)从从红口 蝮蛇蛇毒中分离出一种A-纤 维蛋白原溶解酶，该酶为分子量25 360的单链肽，等电点大于10. 0。在pH5. 6、7. 4或8. 8 条件下6CTC加热30min可使酶的活性彻底消失，EDTA和半胱氨酸也能抑制它的活性。 这种酶只能水解纤维蛋白原的A(a)链，对B(p)和7链的水解能力几乎没有。另外，该酶 还具有酪蛋白水解活性和纤溶活性。

Nikai等(1983)从西部菱斑响尾蛇蛇毒中分离出一种纤维蛋白原溶 解酶，该酶先水解纤维蛋白原的A(c0链，接着水解B(卩)链，其水解作用的方式与从东部 菱斑响尾蛇蛇毒中分离的Crotdase相似，只不过后者是类凝血酶，水解纤维蛋白原的结果是使其凝固。从中分离的纤维蛋白原溶解酶还能释放激 肽，并能水解TAME、BAEE和TLME，但不能水解BAA、TAA和ATEE。该酶为酸性蛋 白，等电点为4. 6,由272个氨其酸组成，分子量31 000,其中酸性氨基酸占21%，纤维蛋 白原溶解酶与胰蛋白酶不同，大豆胰蛋白酶抑制剂不能抑制其活性，但DFP能够起抑制 作用，这说明该酶是一种丝氨酸蛋白酶。研究还表明，该酶在15ug/g的剂量下对小白鼠 无致死作用，也无出血活性，但能引起毛细血管透性增加。不久，Bharat等(1984)也对C.

毒中的纤维蛋白原溶解酶进行了分离纯化。他们共分离出I、I、I和IV等4种抗凝 组分，其中I和W不作用血浆中的纤维蛋白原，但能水解纯化的纤维蛋白原，水解作用时 先破坏A00链，然后再破坏B(卩)链和7链。这两种酶都是金属蛋白酶，每分子含一个 2!12+，£0丁人和32-球蛋白可以抑制其活性。I和IV都是单链肽，前者的分子量为20 000; 后者的分子量为46 000,含有一个游离的巯基，为糖蛋白。2种酶的最适pH为7.0,最适 反应温度为37°C。H和I对血浆中和纯化的纤维蛋白原都能水解，但它们只作用于B((3) 链，对A(a)链和7链没有影响。它们都为碱性丝氨酸蛋白酶，DFP和苯甲磺酰氟能够抑 制其活性。二者的最适反应温度为50℃〜65°C。I是单链状，含糖，分子量为31 000; m含 2个肽链，每个肽链分子量13 000,整个分子的分子量为24 000。I和I水解B(β)链后释 放出一个分子量为5 000的小肽，对AO)和7链没有影响。由于这2种酶可以作用于血 浆中的纤维蛋白原，推测它们与蛇伤后蛇毒产生的抗凝作用有关。现在还没有比较出 Toshiaki和Bhamt分离的纤维蛋白原溶解酶之间的异同，对它们之间的关系还难下结 论。

Shimizu等(1987)从铜头蝮蛇毒中分离出一种纤维蛋白原 溶解酶，该酶为一种单链肽，分子量60 000〜64 000。其活性可以被二硫苏糖醇抑制。它水 解纤维蛋白原B链的速度远远大于A链的速度，但随着温度的提高0°C〜45°C)，这种特 性变得越来越不明显。它的水解作用只能在中性条件下进行。Dyr等（1989)也对

蛇毒中的纤维蛋白原溶解酶进行了分离纯化。他们得到2种组分，这2 种酶水解纤维蛋白原A链和B链的速度不同，但都是丝氨酸蛋白酶，都含碳水化合物，分 子量都在68 000左右。它们的等电点也相近，分别为6. 4和5. 4。看来Shimiza等人分离 的纤维蛋白原溶解酶就是这2种酶中的1种。

Ouyang等在1976年就对洛铁头蛇毒中的纤维蛋白 原溶解酶作了研究，发现该毒中有2种纤维蛋白溶解组分。以后进一步发现这2种组分水 解方式不同，一种专一地水解纤维蛋白原的A(a)链，称为a-纤维蛋白原溶解酶，该酶还能 抑制血小板的聚集;另一种特异地水解纤维蛋白原的B((3)链，称为p-纤维蛋白原溶解酶， 该酶对血小板没有影响。最近，Teng等发现纤维蛋白原溶解酶水解人的纤维蛋白原比 牛的纤维蛋白原快，对人、狗、鸽和家兔血浆纤维蛋白原的水解作用依次减小。a-纤维蛋白 原溶解酶对上述4种动物血浆纤维蛋白的水解速度相近。研究还发现4种动物的血清都 能强烈地抑a-纤维蛋白原溶解酶对人纤维蛋白原的水解作用；而4种动物血清对屮纤维 蛋白原溶解酶的抑制作用不同，按家兔、鸽、狗、人的顺序依次减小，这说明2种酶对动物 血浆纤维蛋白原的不同活性与其内的抑制因子强弱有关，如果去除抑制因子的干扰，这种 差别可能就不复存在。

Herbert等(1981)发现黑颈眼镜蛇蛇毒也能水解纤维蛋白原，水解 的对象为A(c0链，对B(β)链和7链作用很小，这种毒还能水解高度交联的纤维蛋白，其 水解作用也有选择性。研究还表明上述作用是蛇毒内某些因子直接作用的结果，与激活纤 维蛋白溶酶原无关。该毒的纤维蛋白原溶解活性可被EDTA和1，10-菲咯啉抑制，加

Zn2+可以逆转EDTA的抑制作用。水解纤维蛋白原的最适pH为7. 0〜8. 0,与大多数含 锌蛋白酶的最适pH相近。

除上述蛇毒中含有纤维蛋白原溶解酶外，K0rnalik(1971)发现食鱼蝮蛇毒，Boffa等发现毒蝰蛇毒也有这种组分。另外，很多具有纤维 蛋白溶解活性和酪蛋白水解活性的酶也能水解纤维蛋白原，只不过作用不太强而已，在这 种情况下，水解作用是非特异的。

(三） 抑制血凝因子

毒蝰蛇毒和极北蝰蛇毒具有抗凝作用，它们通过与凝血酶原酶

(Prothrombinase)结合成复合物而使其失活，从而使凝血酶原不能形成凝血酶。Kamiguti 等(1985)发现心毒具有抗凝作用。经研究表明，该毒的抗凝作用至少 涉及二种机制;①在凝血酶原被激活前，抑制X因子的激活和Xa的活性;②直接作用于 凝血酶使凝血酶失去活性。Che-Ming Teng等(1981)从尖吻蝮蛇毒 中分离出一种抗凝组分，命名为AAV-Xal，在钙离子的存在下AAV-Xal能与Xa结合 形成复合物。AAV- Xal，能够抑制凝血酶原酶(Prothrombinase)水解凝血酶原，因而不能 产生凝血酶。AAV-Xal还能有效地与X因子形成复合物。

Banerjee等(1965)发现，如果圆斑蜂仏s)蛇毒先与含有草酸盐的血衆保 温，向该系统中加Ca2+也不能促进蛇毒对血浆的凝固。V. rtme/仏蛇毒是促凝蛇毒，因此 他们认为该毒中还含有可以破坏111因子的物质，即抗凝血激酶因子(Antithromb0Plastin factor)。以后Ouyang(1957)报道尖吻蝮（A acMto)蛇毒，烙铁头（7\ mMcrowMawa加）蛇 毒和眼镜蛇丹山亚种蛇毒也有抗凝血激酶作用。克蛇毒在高浓度时 表现促凝作用，而在低浓度时表现为抗凝作用，和蛇毒的抗凝作用也部分与它的抗凝血激酶活性有关。Mackay等(1969)对3种眼镜 蛇毒黑唇眼镜蛇、黑颈眼镜蛇和眼镜王蛇蛇毒的抗凝作用进行了研究，发现这些蛇毒的抗凝作用是由于干扰了凝 血激酶的形成。Mackay等（1966)认为白唇曼巴蛇毒的抗凝作

用也是通过上述相似的途径进行的，即或者破坏凝血激酶，或者抑制凝血激酶的生成。 Barkagan等(1967)报道，眼镜蛇外里海亚种蛇毒能使K因子失活，表现 为抗凝血激酶活性。0marow(1969)发现这种蛇毒还能抑制V、M、W、XI和Xm的活性。冲 绳烙铁头蛇毒有促凝和抗凝双重活性，抗凝作用与抑制凝血激酶形成有 关。

(四） 抗凝血酶作用

早在1938年Haunt就报道眼镜蛇蛇毒在体外能使凝血酶失活，但以后没见这方面的报道，是否真有这种组分还不能确定。

(五） 对蛋白C的激活作用

Protein C是血浆中的一种糖蛋白，分子量为62 000,由一条轻链和一条重链组成，经 凝血酶作用后变成一种丝氨酸蛋白酶并释放出一种分子量为1 400的激活肽。激活的 Protein C可以水解V a和Wa使其失活，因而具有抗凝作用。另外，活化的Protein C通过 一种还不太清楚的机制激活纤溶系统从而起到间接抗凝作用。