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蛇毒中 NAD-核苷酶

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   2015-04-06 1820
核心提示:NAD-核苷酶水解尼克酰胺N-核苷键,这种酶广泛存在于各种哺乳动物组织中,后来发现蛇毒中也有这种酶的活性。Bhattacharya(1953)首先证实蛇毒中存在着一种分解 NAD的酶,他把金环蛇蛇毒与NAD—起保温,发现有尼克酰胺放 出。以后Suzuki等(1960)对9种亚洲蛇毒进行了测定,发现棕点竹叶青 和 银环蛇(加叹狀奶蛇毒也有此酶的活性。

NAD-核苷酶水解尼克酰胺N-核苷键,这种酶广泛存在于各种哺乳动物组织中,后来发现蛇毒中也有这种酶的活性。Bhattacharya(1953)首先证实蛇毒中存在着一种分解 NAD的酶,他把金环蛇蛇毒与NAD—起保温,发现有尼克酰胺放 出。以后Suzuki等(1960)对9种亚洲蛇毒进行了测定,发现棕点竹叶青 和 银环蛇(加叹狀奶蛇毒也有此酶的活性。从毒中分离的NAD- 核苷酶比活性比粗毒提高了 5倍左右,无核酸外切酶活性。Tatsuki等(1975)系统地研究 了 37种蛇毒中NAD-核苷酶活性,发现仅下列蛇的蛇毒中有这种酶存在:日本蝮 ” 食鱼蝮 尖吻複 、铜头蝮 、铜头複北方亚种  银环蛇 . 金环蛇 。其中对 蛇毒中NAD-核昔酶的物理化学性质研究 发现,该酶在PH7.5时活性较大,在中性pH范围内稳定,在40℃时稳定,60℃以上失去 活性。纯酶在pH6.0,0. lmol/L的磷酸缓冲液中,在一1CTC条件下保存6个月酶的活力只 降低10%。它能水解b-NAD+、NADP和3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸,Km值分别为8. 3 X 10-4mol/L,5. 7X l0-4mol/L 和 7. 4X 10—4mol/L,但该酶不能水解 a-NAD,NADH, NADPH和NMN+。1. 010_3mol/L的MgCl2和半胱氨酸可以抑制对 解活性 的60%,碘乙酸、PCMB和EDTA对其活性没有影响。Yost和Anderson(l981)从狀- 蛇毒中分离出的NAD-核苷酶能够催化吡啶碱基的交换反应。最近,我国 学者黄婉治等(1988)对尖吻蝮蛇 蛇毒中NAD-核苷酶进行了纯化, 并对它的理化性质和酶学性质进行了广泛的研究。她顺序地用DEAE-Sephadex A-50、 Sephadex G-75、CM-Sephadex C-50 和 Sephadex G-100 对 NAD-核苷酶进行纯化,结果 所得样品活性比粗毒提高了 11. 8倍,得率为3. 9%。纯化的酶反应最适温度为40℃,最适 pH为7. 5。用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定为一条带,用凝胶过滤和SDS-PAGE测定分子 量分别为98 000和50 000。末端氨基酸测定发现只有1种脯氨酸,这说明该酶是由2个 相同的亚基组成的。分析还发现该酶是糖蛋白,等电点为7. 6。这种酶含有金属离子,ED- TA能够抑制其活性,这说明金属离子对酶活性是必要的。该酶水解B-NAD、NADP和B- NGP 的 Km 值分别为0. 50mmol/L,0. 13mmol/L 和 0.16mmol/L。

从Tatsuki等(1975)的研究可以看出,NAD核苷酶的分布并不十分广泛,主要存在 于类 蛇毒中,其他种类的蛇毒 仅有少数几种含有这种酶。在naja属和海蛇毒中没有检测出这 种酶。

对NAD-核苷酶的研究吸引了不少科学家,近年来发现NAD-核苷酶除能水解NAD 等物质外,还具有催化ADP核糖化(ADP-ribosylatkm)和多聚ADP核糖(Poly-ADP-ri- bose)的作用。比较蛇毒NAD-核苷酶和哺乳动物组织中的NAD-核苷酶酶学性质发现, 前者除能水解NAD外,还能水解吡啶衍生物并能催化吡啶碱基取代反应,这些特性与从 猪脑、牛脾中分离的不溶性NAD-核苷酶相似,而从牛精液中分离的可溶NAD-核苷酶的 活性不被尼克酰胺抑制,也不能催化吡啶碱基的取代反应。

 
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