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蛇毒中作用于肽键的酶

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   2015-04-06 2410
核心提示:蛇毒中蛋白水解酶丰富,主要有内肽酶、肽酶和有一定限制特异性的蛋白酶。后一 类如类凝血酶、精氨酸酯水解酶、凝血酶原激活因子、X因子激活因子和激肽释放酶等。响 尾蛇毒和蝰蛇毒含有各种蛋白酶,眼镜蛇毒和海蛇毒有肽酶,但无其他蛋白酶。

蛇毒中蛋白水解酶丰富,主要有内肽酶、肽酶和有一定限制特异性的蛋白酶。后一 类如类凝血酶、精氨酸酯水解酶、凝血酶原激活因子、X因子激活因子和激肽释放酶等。响 尾蛇毒和蝰蛇毒含有各种蛋白酶,眼镜蛇毒和海蛇毒有肽酶,但无其他蛋白酶。具有一定 特异性的蛋白酶在蛇毒中的分布比其他酶更受限制,如X因子激活因子分布在圆斑蝰  (尺蛇毒中,而凝血酶原激活因子则特异地分布在银鱗蝰   蛇毒中。早些时候认为蛇毒中有明胶酶,现在确定蛇毒中的明胶水解活性是由于内肽酶引 起的。事实上,从日本蝮 蛇毒中高度纯化出来的内肽酶不仅能 消化酪蛋白和变性血红蛋白,而且也能水解白明胶。

 1884年首先发现蛇毒能溶解动物肌肉,后来Noc等(1904)发现蛇毒还可 以水解白明胶和纤维蛋白。虽然许多研究者相继报道过蛇毒的蛋白水解作用,但是,          第 个用15种蛇毒和不同底物做系统研究工作的是DeutschDimiz(1955)。他们观察到蛇 毒对胰蛋白酶的典型合成底物之一对苯甲酰精氨酸乙酯(BAEE)的水解活性与这些蛇 毒对蛋白质(如变性血红蛋白)的作用没有相关性,这说明长期以来认为蛇毒内肽酶具有 胰蛋白酶样活性是不够正确的,实际上它们不同于胰蛋白酶。以后从响尾蛇毒和蝰蛇毒中 纯化出多种内肽酶,经研究发现这些内肽酶与哺乳动物和植物中的肽键内切酶(如胰蛋白 酶、t胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶等)不同,这种差别不仅是因为 水解肽键的特异性不同,而且在于动、植物中的蛋白酶多以特异氨基酸的羧基形成的肽键 为水解对象,而蛇毒中的内肽酶则以特异氨基酸的氨基形成的肽键为水解对象。蛇毒中的 类凝血酶、激肽释放酶、精氨酸酯酶的存在也是粗毒水解作用不同于哺乳动物蛋白酶的原 因之一。表3-11-5,3-11-6和表3-11-7说明了一些蛋白水解活性在各种蛇毒中的分布。

内肽酶主要分布在响尾蛇毒和蝰蛇毒中,眼镜蛇毒不含 或含有很少内肽酶,尽管唾蛇 眼镜王蛇 蛇毒都能水解酪蛋白,但与响尾蛇毒和蝰蛇毒相活性也低得多。海蛇毒也无内肽酶 活性。 类蛇中的蛇毒含有很强的蛋白酶活性。

蛇毒内肽酶可以催化很多自然或合成底物的水解。自然底物如酪蛋白、血红蛋白、白 明胶、弹性蛋白、胶原蛋白原、胰岛素、胰高血糖素、舒缓激肽等;人工合成底物如多聚赖氨 酸、多聚酪氨酸、多聚苯丙氨酸和多聚色氨酸等。这些酶通常对人工合成的二肽和三肽显 示出较小的活性,它们不能水解酯键和酰胺键,也不具有肽链外切酶的活性。这类酶水解 的底物可以用一个通式表示:R—NH—CHR—CO—XR代表丙氨酸、酪氨酸、苏氨酸、天 冬氨酸、天门冬酰胺、色氨酸、苯丙氨酸、组氨酸和甘氨酸侧链,底物中的X主要代表苯丙 氨酸、亮氨酸和缬氨酸,内肽酶水解C0—X键。内肽酶还有一个较大的特点,就是它们都 含二价金属离子。其酶活性可以被EDTA抑制。从上述可以看出,蛇毒内肽酶和胰蛋白酶 等虽然都是内肽酶,但有一定的差别,主要表现在以下几个方面:①水解肽键的特异性不 同,蛇毒内肽酶多以L-亮氨酸或L-苯丙氨酸氨基形成的肽键为水解对象,而胰蛋白酶不 但肽键专一性不同,而且水解的肽键是特异氨基酸羟基与其他氨基酸形成的肽键;②虽然 蛇毒内肽酶在水解合成底物BAEETAME方面与胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶相似,但 水解这两种合成物的活性与水解自然蛋白(如血红蛋白和酪蛋白)的活性不平行,而且胰 凝乳蛋白酶可以水解合成底物BETTATEE,但蛇毒内肽酶却不能;③抑制胰蛋白酶 活性的大豆胰蛋白酶抑制剂不能抑制蛇毒内肽酶的活性。

 
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