蛇毒中磷脂酶B和C

如前所述，所有被研究过的蛇毒都含有PLA2。一些学者还发现有些蛇毒经沸水浴加 热处理后，还能继续水解溶血卵磷脂而表现出磷脂酶B的活性，然而这种活性是PLA2的 另一方面的作用还是由独立磷脂酶B产生的作用还有争论。

首先发现磷脂酶B活性的是Do"y等（1961)。Doery和Pearson (1964)在澳大利亚 蛇毒中也发现具有这种酶的活性。后来，Shiloah研究证明巴勒斯坦蝰蛇 蛇毒中的PLA2有能力水解2位卵磷脂和1位溶血卵磷脂。这样，这个酶就显示了 PLA2和 磷脂酶B的活性，后一活性能水解前一反应的产物。从 蛇毒中分离的PLA2

对卵磷脂水解的最适pH为9. 0,在这种条件下，磷脂酶B的活性很低。在pH10. 5时，酶 的稳定性增加。溶血卵鱗脂被水解的Limeweaver-Burk图为线型，Km为1. lmmol/L， Kcat = 0.55/S，反应条件为pH10.0,37℃。在相同条件下，如用2-脱氧溶血卵磷脂作底物， 则Kcat = 0.01/s。用卵磷脂作底物，正常情况下这些常数是测不出来的，因为底物浓度为 0. 25mmol/L时，卵磷脂被水解的速度(pH9. 0)大约是溶血卵磷脂被水解速度的1000倍 (PH10. 0)。纯化的PLA2活性和磷脂酶B活性如此大的差别至少部分由水介质中卵磷脂 和溶血卵磷脂胶粒的理化性质上的差别引起的。现在知道，卵磷脂在lOg-Vml(大约0. 012mmol/L)低浓度时形成薄层结构，而溶血卵磷脂在l04g/ml(大约0. 16mmol/L)低浓 度时却形成了规则的球形胶团。因此，胶粒的大小与形状可能影响了酶与底物结合的作 用。乙醚能提高PLA2活性、抑制磷脂酶B活性的事实也说明水解速度的差别与底物的理 化性质有关。因为卵磷脂是醚溶性的，而溶血卵磷脂却不是。这些证据表明，上述所发现 的磷脂酶B活性是PLA2自身二元作用的结果。

最近，Bernheimer等（1986)从澳大利亚的澳洲铜头蛇和柯勒 提伊澳蛇(尸^蛇毒中部分纯化出磷脂酶B，从而最终证实了蛇毒中磷脂酶 B的存在。以磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰丝氨酸为底物，该酶具 有磷脂酶B的活性，但不能水解鞘磷脂。过去对蛇毒研究很少，只知 道该毒对大白鼠的致死剂量为0. 48mg/kg以及含有4种毒性组分。这两种蛇毒对洗涤的 家兔红细胞有直接溶血作用，这种溶血作用与温度有关。这说明蛇毒组分中可能含有磷脂 酶，以后进一步研究发现这些蛇毒对稀释后的卵黄有乳化作用，起这种作用的组分很可能 是磷脂酶B，因为磷脂酶A2尽管对上述底物有水解作用，但水解作用的结果是使底物被 清除而不是仅仅被乳化。以后又进一步证实，对卵黄的乳化作用和溶血作用都是由一种成 分磷脂酶B所为。从这两种蛇毒中部分纯化的磷脂酶B对红细胞的溶血作用动力学特点 与粗毒不同，其表现在两个方面:          第一是粗毒表现的溶血作用有“热-冷”效应，即与温度相 关,而部分纯化的磷脂酶B的这种效应较小；          第二个不同点是，粗毒的浓度下降时，溶血 的百分数急剧下降，而用部分纯化的磷脂酶B作用时，虽然也存在着剂量与效应相关的 性质，但没有粗毒明显。这种现象可能是由于粗毒中含有2种或2种以上作用于红细胞的 组分，而PLA2就是其中的一种。

过去Doery和Pearson (1964)对10种蛇毒中的磷脂酶B活性进行了测定，发现澳 洲铜头蛇 和伊澳蛇 蛇毒具有这种酶的活性，但他 们所用的条件是PH9. 5。他们还指出只有在pH8. 0以上才能测定出磷脂酶B的活性，在 这样高pH条件下，PLA2的活性受到抑制，所以有可能是PLA2的另一种活性引起。 Bemheimer等所使用的条件是在生理PH6. 8,这种情况下表现出磷脂酶B活性，说明蛇 毒中可能确有这种酶独立存在。Bernheimer等（1987)从柯勒提伊澳蛇

蛇毒中彻底纯化出了磷脂酶B，这无疑说明了这种酶的存在。用凝胶过滤法测定分子 量为35 000,用SDS-PAGE法测定分子量为16 500,因此认为这种酶以二聚体的形式存 在。该酶的等电点为6. 2,与从同一蛇毒中纯化出的PLA2有明显的差别。这种磷脂酶能够水解磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺，但对其他测试所用的磷脂不能起作用。这种酶与 PLA2相似，都对热稳定。在体外，它能对家兔和人红细胞产生强烈的溶血作用，但对牛和 绵羊的红细胞无水解作用。磷脂酶B对卵黄稀释液有较强的搅乱作用，还能对培养的横 纹肌肉瘤细胞发挥细胞毒作用。注射该酶到大白鼠体内后动物会产生蛋白尿。