蛇毒中其他活性物质相比，神经生长因子(NGF)是最令人费解又感兴趣的一类物 质。现在已经知道NGF是调节交感神经元生长、分化的物质，有时对感觉神经组织的生 长和分化也有一定的作用。从蛇毒中发现NGF是非常偶然的，有人观察NGF对神经生 长的刺激作用，方法是把能产生NGF的鼠肉瘤细胞180移入发育3天的鸡胚体内，当时 没有搞清NGF的本质，设想可能是蛋白质或核蛋白。为了证实是否为核蛋白，实验中把 具有核酸外切酶活性的蛇毒粗组分加入到鸡胚内，目的是除去核酸，以便确定NGF是否 为核蛋白，结果意外地发现所加的蛇毒组分本身含有NGF。
NGF分布很广，各种哺乳动物组织都有这种物质，其中雄鼠额下腺中NGF的含量最 高。现在知道眼镜蛇毒和蝰蛇毒中NGF的含量比响尾蛇毒中的含量髙,海蛇毒中没有 NGF活性。NGF在蛇毒中的含量很难精确测定，约在0. 5%以下，但比一般组织高得多。 其他动物毒如蜂毒、蝎毒、蜘蛛毒和蟾毒都没有NGF这种物质。
NGF —般不具有酶的活性，仅少数几种具有蛋白酶和RN酶活性，但这些活性似乎 与NGF的功能无关。有的试剂或条件可以使酶的活性消失，但NGF的生物学活性仍存 在。纯的NGF没有毒性。
(―)响尾蛇毒NGF
所有响尾蛇毒似乎都含有NGF，其中对东部菱斑响尾蛇和食鱼蝮蛇毒NGF a研究得较多。最初对NGF的分离纯化以蛇毒为材料。纯化过程包括硫酸铵沉淀和DEAE-Cellul0Se、DEAE-Cellulose层 析。分离过程中特别要先把粗毒溶于7. 5mol/L尿素的lmmol/L NaOH中，并在(TC下放 置90min，然后用(NH4)2S04沉淀。如果没有这种处理，在以后的层析过程中，NGF会大 量失活。前述处理过程能引起NGF的氨甲酰化，修饰作用是由尿素中的氰酸盐杂质引起 的，这种修饰作用使NGF生物活性在以后的分离过程中不易丧生。经上述纯化后的NGF 基本上为纯品，超离心分析S2。为2. 28，由此推测出的分子量为20 000。该组分的E= 10. 3，在280nm和260nm处的紫外吸收光比值（280nm/260nm)为1. 3。分析还表明，该 NGF含有1. 6%己糖。纯化的NGF的生物活性是鼠肉瘤180细胞NGF生物活性的1 000 倍。该因子对热不稳定，在0. lmol/L NaOH 261：条件下处理lh生物活性不变，但原来具有的RN酶和蛋白酶活性完全消失。它不易透过半透膜，用RN酶和DN酶处理也不会失 活，但用胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶处理会使生物活性降低或丧失。Banks等 (1968)用另一种方法纯化出的蛇毒NGF的性质与Cohen等(1959)纯化的NGF不太一样。Angeletti等对毒NGF进行了纯化，并研究了它的物 理化学性质。对蛇毒NGF纯化过程比较复杂，似乎有几种NGF存在，读者可参见原文。Angeletti等同时还对美洲矛头蝮蛇毒NGF进行了分 离和研究，其分离方法与分离蛇毒NGF相似。纯化后的NGF用凝胶过滤法测定分子量时发现所得组分不是单一的，但主要成分的分子量为30 000。除上述3种响 尾蛇毒外，下列响尾蛇的蛇毒中的NGF也得到了纯化或部分纯分:西部菱斑响尾蛇(C. aZmr)、铜头複、红口竣和矛头竣。前3种蛇毒仅用Sephadex G-100对其进行层析，虽然层析图谱各不相同，但其 NGF活性都在20 000〜40 000分子量的范围内出现，这说明响尾蛇毒中NGF的分子量 大小有相似性 蛇毒 NGF 可经 DEAE-Cellulose、Sephadex G-100 和 QAE A-25层析得到纯化，用凝胶电泳和氨基末端测定仍不是纯品，含有Ser和Gly两种氨基 末端，其中活性组分的分子量为34 000,等电点为10. 5。有趣的是如用神经氨酸酶处理分 离出的NGF后，原来所有蛋白电泳带电泳速度均改变30%左右，这种变化可能与分子中 唾液酸被去除有关，所以说A蛇毒NGF是一种糖蛋白。用QAE A-25、SPC-25和Sephadex G-100对蛇毒中的NGF进彳了分离纯化后，再用凝胶电泳 检测此分离出的NGF发现仍不纯，其中2种主要成分的等电点分别为8. 0和9. 0。与蛇毒NGF相似，它们约含12%的糖，其中包括N-乙酰葡萄糖、葡萄糖、甘露 糖和半乳糖。用凝胶过滤法测其分子量为35 000,而用SDS-PAGE测定其分子量为 19 000,这说明NGF可能以二聚体的形式存在。
(二）蝰蛇毒NGF
蝰蛇毒中也含有NGF，其中对圆斑蝰蛇毒NGF研究得较多。从该蛇毒中纯化的NGF在pH3. 8和pH5. 2条件下用圆盘电泳法测定为一条蛋白带，等电点为 10. 5,用超离心和凝胶过滤法测定其分子量分别为37 000和34 000,分子形状为长形，轴 比为1 : 7,分子没有聚合现象。这种NGF较大的特点是含有20%的碳水化合物，其中包 括4个果糖、8个甘露糖、9个半乳糖、14个N-乙酰葡萄糖胺和2个N-乙酰神经氨酸。分 子中含有大量的谷氨酰胺和天门冬氨酰胺，属碱性蛋白。Banks等（1968)在对蛇毒NGF研究时发现，该毒NGF有3种，等电点在9. 5〜11. 0之间，沉降系数分别 为2. 92、2. 83和2. 88,分子量分别为42 000、38 000和39 000,它们的N-端都含有组氨酸 残基。从蛇毒中分离出的NGF相当稳定,0. lmol/L HC1或0. lmol/L NaOH 不会引起失活，也不被胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、DN酶和RN酶水解，对EDTA透析也不 影响其生物活性，但胃蛋白酶或9CTC加热，15min可以使其生物活性全部丧失。Bailey等 (1975)从沙蝰蛇毒中分离的NGF用凝胶过滤法测定分 子量为34 000,等电点为8. 5。尽管用凝胶过滤法测定为纯品，但氨基末端测定含有多种 氨基酸,其中含量最多的是异亮氨酸。这种NGF的含糖量高达32%,其中包括3. 2%甘露 糖、2. 8%半乳糖、13. 8% N-乙酰葡萄糖胺和7. 5%的唾液酸。May等（1959)和Mohamed等（1971)分别对毒蝰、锯鱗蝰和彩锯鳞蝰蛇 毒NGF进行了研究，结果表明，后两种蛇毒中NGF的含量较高，而蛇毒NGF的含量较少。
(三）眼镜蛇毒 NGF
在眼镜蛇毒中，印度产的眼镜蛇蛇毒含NGF较多，而且分离也比较容易， 所以在研究蛇毒NGF的性质时多以此毒中的NGF为材料。蛇毒NGF容易分离 的原因在于它对pH的变化不敏感，对许多变性剂也有抗性。分离蛇毒NGF — 般通过两步就达到目的， 第一步使用Sephadex C-25凝胶过滤， 第二步用CM-Cellulose 进行离子交换层析。纯化后的NGF用沉降平衡法测定其分子量为28 000,用SDS-PAGE 法测定分子量为13 000,这说明该分子是由2个相同或相似的亚基组成，其他实验也证明 是由2个相同的亚基组成。毒NGF的等电点为6. 7,这可能因为分子中含有酸性 糖的缘故，它的分子大小、氨基酸组成以及在体内外的生物学活性都与鼠颌下腺的NGF 相似。
从其他眼镜蛇如黑颈眼镜蛇.黑唇眼镜蛇绿曼巴蛇毒中也纯化出了 NGF。其分离、纯化过程相似，都是先用Sephadex G-50凝胶过滤，然后用SP-Sephadex C-25离子交换层析。对于从 毒NGF的纯化还要经过 第三步——Sephadex G-100凝胶层析。这3种来源的NGF都不 十分纯净。从蛇毒中纯化的 NGF分子量分别为22 000、22 000和34 000,等电点分别为9. 0、8. 0和10. 0,它们的含糖量均 小于2%，甩神经氨酸酶处理不影响其电泳特性。
雷少波等（1981)采用 Sephadex G50、CM-Cellulose 32 及 Sepharose 6B 柱层析，自中 华眼镜蛇毒中分离出神经生长因子(NGF)。经3种不同类型的聚丙烯酰胺凝胶电泳及免 疫鉴定证明纯化的NGF为单一组分。此NGF经9天鸡胚背根神经节体外培养证明具有 促进神经节神经纤维生长的活性。经Sepharose 6B凝胶过滤及SDS凝胶电泳测得其分子 量分别为27 000及13 700,故推测中华眼镜蛇毒NGF可能由2条分子量相同的肽链组 成。NGF的等电点为7.1，氨基酸组成与印度眼镜蛇毒NGF部分相似。用体外整体神经 节培养法鉴定NGF活性时，纯化的中华眼镜蛇毒NGF在培养基中浓度为0. 0lMg/ml时 可使神经节神经纤维生长达较大速度。这一浓度与小鼠颌下腺NGF及印度眼镜蛇毒 NGF所需浓度一致。在不纯时，印度眼镜蛇毒NGF活性受毒素的抑制而不能促进神经节 神经纤维的生长。而中华眼镜蛇毒NGF即使在粗毒状况下也表现出生物学活性。这可能 因不同地区蛇毒中各种组分含量不同，因而对于NGF生物学活性影响不同。采用 Sepharose 6B柱层析测得中华眼镜蛇毒NGF的分子量为27 000,而采用SDS凝胶电泳 测得NGF的分子量为13 700,故推测中华眼镜蛇毒NGF也可能由2条分子量不相同的 肽链组成，但有待于氨基酸顺序分析证实。
从NGF的氨基酸组成结果看，中华眼镜蛇毒NGF与蝰蛇毒NGF及小鼠颌下腺 NGF在氨基酸组成上相差较大，但与印度眼镜蛇毒NGF氨基酸组成却较近似，这是因为 中华眼镜蛇与印度眼镜蛇同属于眼镜蛇科，故其蛇毒成分相似。但中华眼镜蛇毒NGF分 子内碱性氨基酸如组氨酸、精氨酸及赖氨酸含量稍多，而天门冬氨酸及谷氨酸等酸性氨基酸含量稍少，这与测得NGF等电点为pH7. 1，较印度眼镜蛇毒NGF等电点为pH6. 7稍 偏碱相符合。
