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蛇毒中不同来源NGF的比较

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   2015-04-06 1220
核心提示:从现有的资料来看,眼镜蛇科蛇毒中的NGF分子量都在25 000左右,都由两个相似 或相同的多肽链组成,等电点在6. 7〜10. 0之间,含糖量都不多。在眼镜蛇毒中,只有绿曼 巴pzWcfc)蛇毒NGF的分子量较大,约为34 000。

(―)科内比较

从现有的资料来看,眼镜蛇蛇毒中的NGF分子量都在25 000左右,都由两个相似 或相同的多肽链组成,等电点在6. 710. 0之间,含糖量都不多。在眼镜蛇毒中,只有绿曼 巴pzWcfc)蛇毒NGF的分子量较大,约为34 000。

响尾蛇毒NGF有不少以二聚体的形式存在。如C. adamanteus、Crotalus d. terrificus、A. Contortrix laticinctus、C. atrox 热 Bothrops 扣raraca蛇毒中的NGF多能够以二聚体的形式存在,如以聚集状态存在,分子量可在 40 00050 000之间。以单体形式存在,分子量在25 000左右。从A. rAo<iostowa和amz蛇毒中分离的 NGF子量较大,约为35 000,含糖量也较高,值得注意的是后两种蛇毒NGF的获得率 相对很低。绝大多数响尾蛇毒NGF的等电点为8. 010. 5。。。。。。。  。。

对蝰蛇毒NGF的纯化不多,主要资料来源于对和两种蛇毒NGF的研究。这两种蛇毒NGF的分子量在35 000左右,为糖蛋白。

(二)科间比较

用抗蛇毒NGF的血清和其他蛇毒NGF进行双向免疫扩散试验,发现这 种抗血清与蛇毒 NGF 有交叉反应,但所需NGF的浓度要比my'a蛇毒中NGF高得多。如果先把抗血清与其他蛇毒NGF —起温育,然后加到体外培养的神经节培养液中,结果发现NGF 活性降低较少(6%),而 蛇毒NGF活性降低约为12%。尽管交叉反应不是很强,但比鼠额下腺NGF对抗m知 NGF血清的反应要大,后者仅有1%的交叉反应,而2种NGF的氨基酸顺序有65%同 源。Bailey等(1976)也做了相似的试验,证实了上述结果,有一点不同的地方是,他的实验 结果其交叉反应性比较大,在5%50%之间,多数NGF和抗血清有20%25%的交叉 反应。

从上述实验可以看出,尽管不同科甚至同科不同种蛇毒NGF在抗原性上有一定的 差别,但蛇毒NGF总的说来是同源的。可以根据分子量以及含糖量不同,把蛇毒NGF分 为两类:—类为队 Agkistrodon piscivorus、C. adamanteus、Bothrops jararaca、N. naja、蛇毒中分离出来的NGF,它们的分子量在25 000左右,由两个相似或相同的亚单位组成,每个亚单位分子量13 000左右,不含糖 或含糖量很低,鼠额下腺NGF的B-亚单位也属于此类。二类为rhodostoma、V. ammodytes ammodytes 和 V. russellisi另—实验室的研究结果)蛇毒中分 

离出来的NGF,这些NGF的分子量较大,含有10%20%的碳水化合物,有些以二聚体 形式存在,有的存在方式不清楚。假如把          第二类NGF的碳水化合物除去,它们的分子量 和          第一类NGF相近,这说明两类NGF的主要差别可能在于糖链部分。应该注意的是现 在分离出的所谓含糖NGF实际上还没有真正得到纯品,有些学者在分析部分纯化的 NGF时发现NGF含有糖,但分析真正纯化后的NGF时发现并无糖的成分。另外,对 蛇毒NGF有两种报道,一种认为含糖,另一种认为不含糖,这也应该引起 注意。也许在脊椎动物中只有一种不含糖类型的NGF,有关含糖NGF的报道可能是因为 样品污染的结果。

(三)蛇毒NGF和鼠NGF的比较

鼠额下腺NGF是一个含a、7 3个亚单位的大分子化合物,沉降系数为7S,其中p 亚基可以从腺体匀浆物中直接分离出来,而且有生物活性。亚单位含有两个相同的肽 链,每个肽链含有118个氨基酸残基,它的氨基酸顺序已被测出。iV. my'a蛇毒中NGF的 部分序列也已经被测出,与鼠NGF相应部位比较其同源性高达64%,如图3-12-2所示。

蛋白一级结构的同源性说明了基因的同源性。有趣的是^知蛇毒和鼠NGF与胰 岛素前体类蛋白质在一级结构上也相似,都有20%的氨基酸相同,这说明蛇毒NGF、鼠 NGF和胰岛素前体类蛋白质由共同的祖先进化而来。不同NGF之间的差别(如知 NGF和鼠NGF)比NGF和胰岛素前体类蛋白之间的差别要小,这说明从很早以前这两 类蛋白就从共同的祖先分开,但都保留了共同的固有结构。对鼠NGF和蛇毒 NGF的三维结构知道得不多,但有证据表明二者的三维结构相似。对鼠NGF研究发现它 含有3个Try残基,其中一个残基在分子表面,一个残基包埋在分子内部,还有一个部分 暴露。n—蛇毒NGF含有4个Try残基,这4个Try对维持NGF的生物活性有重 要作用,它们都能被N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)氧化,说明这些残基处在分子的表面。用 NBS滴定2种NGF,发现滴定曲线相似,可能Mya mya蛇毒NGF的Try分布和鼠额下 腺NGF相似。my'a蛇毒中NGF不能和鼠NGF的a或7亚单位形成复合物。而p 亚单位则能与《和V亚单位形成完整的NGF,这可能因为蛇毒NGF的羧基端没有精氨 酸残基所致,而这种残基是形成复合物必需的。

TV咖NGF和鼠NGF的生物学功能相似,二者的作用都和剂量有关,但从NGF的活性只有鼠NGF的50%。如用幼鼠做试验,产生同样效果时,NGF 的用量比鼠NGF高3倍,但组织学检查证明它们的生物学效应相同。NGF和神经质膜上 受体结合是刺激胚胎组织神经突触伸长的先决条件,对知NGF和鼠125I-NGF竞 争结合的研究发现,加入蛇毒NGF后,原来与组织结合的125I-NGF有80%脱离原组织。 用来标记的鼠NGF代替蛇毒NGF也有相似的结果,这说明和鼠NGF与受体的结合部位是相同的。

用抗鼠NGF血清在体外与蛇毒NGF作用,发现它可以部分抑制和蛇毒中 NGF 的活性,抑制率分别为6%、6%、12%和12%。如果用抗n— NGF血清在体外与鼠NGF作用,抗血清 只能抑制活性的1%。尽管如此,这两种来源的NGF同源性还是明显的。蛇毒NGF和鼠 NGF之间的同源关系还可以从两类动物的分泌器官相似性看出。蛇的毒腺实际上是一种高度进化的腮腺。腺体的后部是主要分泌部位,分泌管上皮细胞含有7颗粒,这种颗粒的 大小、密度和分布都和雄鼠额下腺卷曲管上皮细胞内的颗粒相似。二者的腺体不但含有起 消化和水解作用的酶,而且都有毒性。鼠额下腺可能是哺乳动物中惟一分泌毒物的腺体。


 
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