蛇毒中舒缓激肽增强肽(Bradykinin potentiating peptide简称BPP)是含5个〜13个 氨基酸残基的活性短肽,已有很多文献报道。BPP对血管紧张素I转化酶有很强的抑制 作用。BPP既能抑制激肽酶I增加舒缓激肽的作用,又能抑制血管紧张素I转化酶,使体 内不致产生有加压作用的血管紧张素I,是一种有效的降压物质。现已人工合成了一种更 简单有效的BPP类似物一甲巯丙脯酸(2-甲基-3-巯基丙酰脯氨酸),广泛应用于临床治 疗肾性高血压。
1965年Ferreira在美洲 矛头複jararaca )蛇 毒中首先发现了能在体内外增 加舒缓激肽作用的BPP因子, 并先后阐明9种BPP因子的 结构。其后不久,Kato等也从 日本蝮蛇亚种蛇毒中分离得到5 种BPP组分,并测定了结构。 在我国,1981年上海生化所何 子安等(1981)从浙江蝮蛇亚种蛇毒中纯化了一种BPP组分,并 阐明了它的结构。以后王茂音 等(1983)又对浙江蝮蛇亚种蛇 毒中的BPP进行了深入的研 究,发现共有3种BPP存在。
魏珊等(1988)从江西蝮蛇毒中 纯化出了 3个BPP组分,分别 为9肽、10肽和16肽,这里介 绍他们的分离方法。
用乙醇粗提蛇毒取蛇 毒冷冻干粉l0g,溶于1 000ml 蒸馏水中,在沸水浴中煮沸 lOmin,冷却后加95%乙醇 (500ml/g粗毒),将乙醇混悬液 过滤,上清液在旋转蒸发仪上浓 缩至干。将减压抽干的粉末再用 无水乙醇提取3次,每次20ml,合并提取液浓缩至干。
Sephadex G-15柱层析将上述乙醇提取得到的干粉溶于2ml 0. 02mol/L NH4HC03 缓冲液中,直接加至丨J Sephdex G-15 层析柱(1. 7cmX170cm)中,用 0. 02mol/L pH8. 0 NH4HC03缓冲液进行洗脱。
3.SE-SephadexC-25层析将上述活力峰合并收集,用蒸馏水稀释一倍,并用甲酸 调 pH 至 2. 5 左右。上 SP-Sephadex C-25 层析柱(1. lcmX30cm),用 0. 01mol/L pH2. 5 甲酸铵梯度洗脱(各100ml),见图3-13-50。
Sephadex G-10柱层析将第三步分离后的活力峰收集并浓缩,加到Sephadex G- 10(1. 0cmX 110cm)上脱盐,用O.lmol/LpHl.O的盐酸洗脱,见图3-13-51。收集活力峰用奈氏试剂检査确定不含NH4+后,浓缩以备检测纯度用。