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动物血清中抗出血因子的纯化

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   2015-04-06 540
核心提示:许多学者发现某些蛇和哺乳动物血清中含有能中和蛇毒出血毒素的因子,称为抗出血毒素因子。为了搞清这种因子的作用机制,需要纯化出大量的抗出血毒素因子。常规的分离法如凝胶过滤和离子交换层析

许多学者发现某些蛇和哺乳动物血清中含有能中和蛇毒出血毒素的因子,称为抗出 血毒素因子。为了搞清这种因子的作用机制,需要纯化出大量的抗出血毒素因子。常规的分离法如凝胶过滤和离子交换层析法所需的时间较长,特异性不高,在每步分离中都有一 定量的损失,尤其抗出血毒素因子在血清中含量不高,用常规方法分离更困难。亲和层析 是以大分子的结构和功能为基础的一项分离技术,其特点为快速、特异性高和简便,而且 损失也较常规法为小,尤其在所需成分含量低的情况下,这种方法有无比的优越性。这里 介绍Tarng等(1986)用亲和层析法从一种袋鼠(D油血清中分离纯化抗 出血毒素因子的大致过程。

先用 Sephadex G-200  DEAE-Sephadex A-50 柱分离血清中的抗出血因子。以分离的抗出血因子为抗原对BALB/C白鼠进行免疫,把被免疫后的白 鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP进行融合,所得的杂交细胞能分泌抗出血因子的单克隆抗体。 把杂交细胞注入BALB/C白鼠腹腔内使之产生大量腹水,腹水中的单抗体经DEAE- Sephadex A-50部分纯化后联结到经溴化氰活化的Sepharose 4B胶上。偶合后的亲合柱 用来大规模分离抗出血因子,如图3-13-58所示。

 
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