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溶血毒素的鉴定

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   2015-04-06 2360
核心提示:直接溶血因子是一种作用于膜的碱性多肽,分子量为2 000左右。眼镜蛇毒中的心脏 毒素被证实具有溶血能力,所以,许多作者认为直接溶血因子和心脏毒素实际上是同一种 物质。

直接溶血因子是一种作用于膜的碱性多肽,分子量为2 000左右。眼镜蛇毒中的心脏 毒素被证实具有溶血能力,所以,许多作者认为直接溶血因子和心脏毒素实际上是同一种 物质。此外,在研究眼镜蛇毒中的细胞毒素时,发现它也能直接溶解豚鼠、狗和猫的红细 胞,因而认为直接溶血因子就是细胞毒素。而细胞毒素与心脏毒素的结构也十分相似,所 以有人认为也是同一种物质。由于化学分离分析工作进展很快,而毒理研究工作未能紧紧 跟上,有些具有细胞毒作用的成分尚未检定其是否同时具有心脏毒的作用。因此,在没有 弄清这些问题之前还不能过早地下结论。

直接溶血因子的作用有两个特点:一是不同种族动物的红细胞敏感性不同。豚鼠红细 胞最敏感,其余依次为狗、猫、人、兔、马、鼠、羊,鸡的红细胞最不敏感。这就使人很自然地 想到各种不同动物的红细胞膜具有不同的组成,如卵磷脂对鞘磷脂的比值,可以从4 : 1 一直到1 : 12,差异很大。          第二个特点是直接溶血因子的溶血作用可因极少量的磷脂酶A2 存在而大幅度增加,即两者有明显的协同作用。探其原因在于直接溶血因子引起红细胞脂 结构的轻微干扰即有利于磷脂酶A2的接触,从而加速磷脂的水解。所以,直接溶血因子 与磷脂酶A2同时存在时,其溶血速度可提高3050倍。磷脂被水解的程度与溶血百 分比完全平行。从眼镜蛇毒所得到的磷脂酶A2能水解卵磷脂、脑磷脂和丝氨酸磷脂,但 几乎不水解鞘磷脂和肌醇磷脂,这就可以很容易地解释上述不同动物红细胞溶血敏感性 的顺序。

由于从蛇毒中分离纯化心脏毒素或细胞毒时都会馄有残存的磷脂酶A2,因而表现出 的溶血作用都和混杂的酶量有关。实验表明如果磷脂酶A2的含量下降到0. 001%时,心 脏毒素IV 700fxg/ml浓度以下时几乎不溶血。因此,认为心脏毒素 即为直接溶血因子的说法已面临挑战,或者说直接溶血因子这个名称本身已面临争议。但 从实验中证实的磷脂酶A2和直接溶血因子有协同作用来看,则除磷脂酶A2之外,另一 种影响溶血的物质又不能排除。

溶血毒素虽有一定的毒性,但与蛇毒中其他毒素比较,其毒性往往要小得多,所以通 常不是主要致死成分。

溶血毒素的鉴别方法,通常采用试管法,即直接观察红细胞的溶血作用。

鉴定实验通常采用豚鼠红细胞,也可用大白鼠红细胞。将豚鼠或大白鼠的新鲜血液用 离心机将红细胞分出,再用生理盐水洗涤23次,这样离心后的红细胞就可以用来观 察溶血作用。观察直接溶血现象,可将红细胞悬浮于10倍体积的缓冲液或生理盐水中,加 入少许氯化钙,然后加入一定量要观察的样品在37°C水浴中保温30min后,再用离心法 使未溶解的红细胞沉淀,如果溶血作用强烈,则离心后就不再有沉淀的红细胞,如溶血作 用轻微,亦可见离心后上清液中有明显的血红色,即溶解后的血红蛋白。如观察间接溶血 作用,即在上述红细胞浮悬液中再加入一定量的卵磷脂,在371:保温后,观察因卵磷脂被水解生成溶血磷脂而导致的溶血现象。

 
标签: 溶血毒素 鉴定
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