60年代初，Moror-Perlmuter等用甲醛对巴勒斯坦蜂蛇和彩银鱗蝰的毒素进行脱毒试验，试图制备类毒素。后来，Sawai等用二氢硫辛酸脱毒法制备了对 实验动物有良好免疫原性的黄绿烙铁头蛇毒类毒素，首先提出了类毒素用于人群免疫的 可能性，并在日本奄美大岛（Amami)和Byukyu首次进行了 4万余名志愿者预防接种, 结果大大降低了严重组织坏死病例的发生。此后，Oknogi等应用乙醇和甲醛脱毒提纯制 成了免疫效果很好的、且无副作用的黄绿烙铁头类毒素。Sadahiro和Kondo等制备出产 生抗出血毒素抗体比二氢硫辛酸黄绿烙铁头蛇类毒素为优的甲醛黄绿烙铁头蛇类毒素。 Sadahiro、Kondo等又制备出甲醛出血毒素组分（HR,和HR2)混合类毒素。此类毒素对 HR类毒素组分的相对效力为8. 0(可信限为2. 4〜2. 71)，对类毒素组分的相对 效力则为0. 7 (可信限为0. 2〜2. 6)。应用此种类毒素免疫的猴子可完全抵抗5mg黄
绿烙铁头蛇毒的攻击，部分猴子还可抵抗lOmg粗毒的攻击。在志愿者的免疫注射中未发 现任何副作用，2次注射后血中可检出一定量的抗体。1972年Sawai等用乙醇沉淀法在 低温下提纯粗毒，再用甲醛脱毒制备出抗组织坏死作用较好的乙醇甲醛黄绿烙铁头蛇类 毒素。1972年Someya等对用多种方法制备的各种黄绿烙铁头蛇类毒素进行了免疫人体 的试验。1978年，Sadahiro等发表了黄绿烙铁头蛇毒标准类毒素。Dumarey等用甲醛、戊 二醛对黑颈眼镜蛇毒脱毒，制备了黑颈眼镜蛇类毒素。1979年日本公布了小此木丘等从 蝮蛇类蛇毒类毒素制造方法的专利公报，同时日本政府又制定了黄绿烙铁头蛇毒类毒素 生物制品操作规程。1982年马来西亚研究出具有预防价值较高的蝮蛇类毒素。目前虎蛇 类毒素已制成。据报道，这些类毒素在预防毒蛇咬伤方面都取得了肯定的效果和较好的 应用价值。
在国内，上海生物制品研究所和福建医学院曾用甲醛脱毒制备五步蛇类毒素，用于注 射马、兔等动物来制备抗蛇毒血清以及探索防治蛇伤的可能性。安徽中医学院李云龙等用 甲醛脱毒法制备出符合生物制品要求、免疫原性较好的磷酸铝吸附蝮蛇类毒素，并进行了 多方面详细研究。
二、蛇毒类毒素制备方法
蛇毒的脱毒方法有甲醛法、戊二醛法、二氢硫辛酸法、谷胱甘肽法、美蓝法、依地酸法 及7射线照射法等，但以甲醛法较稳定，免疫原性好。以下介绍几种制备蛇毒类毒素常用 的方法。
(一） 渐增量甲醛脱毒法
先用33. 3mol/L磷酸缓冲液将蛇毒(或提纯蛇毒或粗毒)配成1%浓度，再于 第1、 第 3、 第5、 第7天分别各加入0. 2%甲醛(V/V)，最后甲醛含量为0. 8%(V/V)，在温箱中脱 毒。10天后，每天取出注射小白鼠作毒性检查，至完全脱毒为止。加0.01%硫柳汞(W/ V)，在4°C冰箱中用50倍的无菌生理盐水透析2天〜3天，经除菌过滤后，做LF、含氮 量、甲醛浓度测定和无菌检査。然后根据含氮量将其稀释至所需浓度（含蛋白质3mg/ ml)，再加吸附剂磷酸铝，使呈1.3mg/ml。补足0.01%硫柳汞(W/V)，分装安瓿。经理化 检查和无菌检查合格即为成品，4'C保存待用。
(二） 一次甲醛脱毒法
脱毒用新鲜配制的无菌0. 2%(W/V)甲醛、PBS(66. 7mol/L，pH7. 0),在无菌操 作下配制2mg/ml(W/V)蛇毒溶液(如蝮蛇毒），置37°C脱毒，7天后每天检查脱毒情况， 至完全脱毒为止。加入0. 01%硫柳汞(W/V)，在无菌操作下于4°C低温用50倍以上无菌 生理盐水透析48h,经除菌过滤后，做LF、含氮量、甲醛浓度测定和无菌检查。
吸附剂吸附用磷酸铝吸附使含量为1%〜1. 5%的浓度，加入0. 01%硫柳汞(W/ V),摇匀。在无菌操作下分装、封瓶、标注。抽样作理化性质和无菌检查。也可将l0mg/ml 的蛇毒生理盐水溶液在弱酸或弱碱或中性环境下加入0. 2%甲醛(W/V)进行脱毒，再用 无菌生理盐水稀释至2mg/ml的浓度，用铝盐吸附而制成。检查合格后，即为吸附甲醛蛇 毒类毒素，置4X：冰箱保存待用。
(三） 低温乙醇提纯甲醛脱毒法
用无菌pH7. 0，16. 7mol/L磷酸盐缓冲液将蛇毒(如黄绿珞铁头蛇毒)配成1%浓度， 在一1CTC下加入纯酒精，使最终浓度为30%，置一3CTC中5h后，在一10°C下1 OOOr/min 离心30min，沉淀物再混悬于pH7. 0 PBS中，在混悬液中分4次加入甲醛液，使其最后浓 度为1%。脱毒后，经无菌生理盐水透析，除菌过滤，加入防腐剂，用磷酸铝吸附(1. 35mg/ ml)，使蛋白质最后含量为lmg/ml，经理化、微生物等检定合格即为低温乙醇提纯甲醛脱 毒类毒素。
(四） 戊二醛脱毒法
用25 %戊二醛进行脱毒。在PH7. 0缓冲盐溶液的蛇毒溶液中，加入戊二醛，使其含量 为2. 5Xl(T3mol/L，蛇毒（如眼镜蛇毒）蛋白含量为lmg/ml的浓度，置2(TC18h〜24h (90%以上毒性被脱去），加入赖氨酸终止反应。经除菌过滤后，加入吸附剂吸附，再加入防 腐剂，分装，检定合格后即为吸附戊二醛蛇毒类毒素。
(五） 二氢硫辛酸脱毒法
新鲜配制25mg/ml蛇毒（如黄绿烙铁头蛇毒）生理盐水溶液，以300r/min离心 lOmin，上清液经除菌过滤，无菌试验确定无菌，按50mg/2ml分装于小瓶，冷冻干燥。每瓶 干燥毒加入无菌0. 5%二氢硫辛酸溶液10ml，溶解后置37°C lh脱毒，这时呈pH7. 2的乳 白色溶液。加入防腐剂后，经无菌、安全、理化检定合格即为二氢硫辛酸蛇毒类毒素。也可 加入吸附剂制成吸附二氢硫辛酸蛇毒类毒素。
(六） 7射线照射脱毒法
用100KR的7射线照射圆斑蝰蛇毒,可使其脱毒而保留抗原 性，而成为蛇毒类毒素。
