(一）在制备抗蛇毒血清中的应用
蛇毒具有强烈的毒性，作为免疫原注射的动物，剂量稍大会造成动物中毒甚至会引死亡，而且也影响机体的免疫功能。剂量小、抗原性弱的蛇毒所引起的机体免疫应答也小， 产生的抗体也达不到要求。所以较好经脱毒后成为类毒素，再作为免疫原即可适当加大用 量，增加免疫效果，也不会造成动物体的中毒，可以制备出高滴度的蛇毒抗血清。所以蛇毒 类毒素已在国内外制备抗蛇毒血清中广泛应用。
(二）预防毒蛇咬伤
蛇毒类毒素更重要的作用是预防毒蛇咬伤。如果是像预防传染病(如白喉、破伤风)一 样，用类毒素给人群进行人工自动免疫以获得对蛇毒一定的免疫力（即具有一定量的抗 体），即可以阻止较大量的蛇毒对机体的毒害，以赢得及时有效的治疗时间，而避免局部严 重病损和后遗症的发生，也可降低死亡率。这是多年来国内外医学家和蛇伤医务工作者的 奋斗目标。
Sawai等于1965年4月至1967年12月在日本奄美大岛和Ryakya岛首次用二氢硫 辛酸脱毒的黄绿烙铁头蛇毒类毒素进行4万余名志愿者的预防接种，虽然未能降低黄绿 烙铁头毒蛇咬伤人群的死亡率，但是大大降低了该蛇伤严重坏死病例的发生。1971年， Kondo等曾用甲醛脱毒混合类毒素No. 12(按Sadahiro等方法制备。此制剂含蛋白质 lmg，磷酸铝1. 35mg，pH5. 93汨艮类毒素与HR2类毒素量的比为1 : 17)，免疫豚鼠并与 参考类毒素比较，类毒素相对效力达到8. 0(可信限2. 4〜2. 71)，对HR2类毒素的相 对效力为0. 7(可信限0. 2〜2. 6)。此类毒素免疫的猴子可对5mg黄绿烙铁头蛇毒的攻击 有完美无缺的抵抗力，部分猴子还可以抵抗l0mg粗毒的攻击，接近于一次蛇伤平均注毒 13mg粗毒的量。说明它具有相当的预防蛇伤的实用价值。Someya等曾根据日本卫生保 健和福利部烙铁头类毒素委员会的要求，比较了各种黄绿烙铁头类毒素制剂的免疫效力 (结果如表3-16-13),并对混合类毒素(No. 12)进行了人体免疫观察(表3-16-14)。此类毒 素对人体的免疫，虽然对HR:的抗体免疫单位不如在猴体内高，2次免疫也达到2. 0IU/ ml (0. 5ml类毒素免疫组)和2. 3IU/ml(0. lml类毒素免疫组），对HR2高达13. 4IU/ml (0. 5ml类毒素免疫组)和12. 4lU/ml(0. lml类毒素免疫组）。这个抗HRi的滴度相当于 给予病人的黄绿烙铁头抗蛇毒血清的治疗量。1978年Sadahiro等按以前方法制备了黄绿 烙铁头蛇毒各种混合类毒素，大多达到了较好的免疫效果（见表3-16-15)。
表3-16-13黄绿烙铁头蛇毒类毒素的效力（)
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类毒素制剂 |
蛋白质 (mg/ml) |
铝 (mg/ml) |
相对效力（可信限） |
|
|
HR,类毒素 |
hr2类毒素 |
|||
|
参考类毒素 |
3.0 |
1.35 |
1 |
1 |
|
DHTA类毒素 |
1.0 |
1.35 |
0.08(0. 05〜0.13) |
— |
|
混合类毒素(No.12-P2) |
1.0 |
1.35 |
10. 2(5. 5〜19. 2) |
16.6(5. 3〜51. 5) |
|
APF类毒素 |
1.0 |
1.35 |
0.6(0. 4〜0.9) |
0.03(0. 02〜0.06) |
表3-16-14黄绿烙铁头类毒素免疫人体后血中抗毒素效价W/ml)()
第二次免疫注射后 第三次免疫注射后
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组别 |
试验 |
效价 |
平均效价 |
试验 |
效价 |
平均效价 |
|
|
人数 |
范围 |
(可信限） |
人数 |
范围 |
(可信限） |
|
第1组* |
17 |
|
|
19 |
|
|
|
抗HR, |
|
1. 2—3. 2 |
(2-° ) 1 1.7〜2. 3/ |
|
1. 7〜4. 5 |
(3'° ) 1 2. 6〜3. 4/ |
|
抗hr2 |
|
7. 1 〜40. 0 |
I13'4 ) U0. 7〜16. 9/ |
|
7. 7〜41. 0 |
/ 16.2 \ \ 13. 0—20.1/ |
|
第2组* |
22 |
|
|
29 |
|
|
|
抗HR! |
|
1.2 〜4.0 |
(2-3 ) 1 1.9〜2. 7/ |
|
1. 7〜5. 6 |
(2.9 ) \ 2. 6〜3. 27 |
|
抗hr2 |
|
10. 0〜20. 0 |
12.4 (11. 2〜13. 7) |
|
9. 2〜36. 0 |
16.1 (14. 4〜18.0) |
* 第1组为0. 5ml类毒素免疫组； 第2组为0. lml类毒素免疫组。
类毒素免疫的猴子抗HR}血清滴度都在5/x/ml或更高，皆能完全抵抗5mg(相当于1个 致死量)蛇毒至7mg蛇毒的攻击。用混合类毒素No. 12几次缓慢免疫的几个志愿者血液 中也达到相当高的抗体水平并维持数年，如表3-16-14。
表3-16-15各种黄绿烙铁头蛇毒类毒素制剂的组成和效力（摘自Sadahiro，et al. 1978)
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类毒素 号码 |
蛋白质浓度 (mg/ml) |
肌和hr2 混合比 |
含铝浓度 (mg/ml) |
pH- |
相对效力(Imu/ml) # HRi HR2 |
|
|
12 |
1.0 |
1*1 |
1. 35 |
5. 93 |
63(22〜179)a |
1.1(0. 5〜3) |
|
13 |
0. 5 |
2. 8 : 1 |
0. 34 |
6. 1 |
38(16〜92) |
6. 3(3. 9〜10) |
|
13 —B** |
0.5 |
2.8 : 1 |
1.35 |
6.0 |
75(25〜220) |
5. 3(2. 3〜12) |
|
14 |
0.5 |
2.8 : 1 |
0. 34 |
5. 5 |
11(6. 8〜19) |
1.0(0. 7〜1.6) |
|
15 |
0.5 |
2. 8 ： 1 |
0. 8 |
5.9 |
18(12〜27) |
2. 0(1. 5〜2. 7) |
|
16 |
0.2 |
2.7 : 1 |
0. 8 |
6.0 |
11(4.8〜25) |
0.6(0. 4〜1) |
|
17 |
1.0 |
— |
0. 9 |
6. 75 |
4. 9(2. 4〜9. 8) |
0. 2(0.1 〜0. 4) |
第一、第二次皮下注射0.5ml， 第三次皮下注射lml吸附蝮蛇类毒素在另一组298名志愿者中，在基础免疫后有208人(69. 8%)产生的抗HR!滴度超过 lIU/ml,并且在加强免疫之后，这个比例上升到92. 1%(140/150)。一个成人（60kg)循环 血的总量约4 600ml，如果循环血中抗毒素的滴度约有1. 3IU/ml〜2. 6IU/ml就可以完 全对抗蛇伤中毒。这就说明了此类毒素具有相当有效的预防保护价值，并且此种类毒素对 人体一般无不良反应。Someya等观察了 2组志愿者中用不同剂量的类毒素（一组用 0. 5ml类毒素，另一组用0. lml类毒素)3次注射(间隔4周及5月）后每次的反应。初次 注射后的反应一般很少而弱（仅出现局部疼痛），但 第二次注射后，接受0. 5ml类毒素免 疫的29名志愿者中，有3人局部肿胀直径超过100mm，其中1人在注射后24h出现明显 的肿胀和发红并扩及整个上臂，但在数日内反应逐渐消失。在 第三次注射0. 5ml类毒素 的20名志愿者中，有1人也出现了上述的严重局部反应。在注射0. 5ml类毒素的B组中， 第二次免疫注射时有2人发生严重反应，但皆无全身反应。说明它的不良反应和其他微生 物毒素类毒素一样，可以作为临床应用。
安徽中医学院李云龙等应用甲醛脱毒法制备的吸附蝮蛇类毒素具有较强的免疫效 力,0. 5ml吸附蝮蛇类毒素间隔4周皮下注射2针的免疫基础，及1年后lml该类毒素皮 下注射的加强免疫的有效免疫力可维持1年。75只家兔基础免疫后1月〜6月及加强免 疫后1月〜6月的血清抗体滴度的几何均数在0. 096mg/ml〜0. 209mg/ml之间。免疫家 兔在整个免疫期内血清抗体滴度的几何均数与未免疫的正常家兔对照组滴度的几何均数 间的 F 检验 F = 44. 2，P<0. 01，Q 检验 P<0. 01,见表 3-16-16 和图 3-16-3。
3只猕猴的血清中和抗体效价水平和消长曲线基本上同家兔的免疫水平。平均2. 2kg 的免疫家兔在第二次基础免疫后第8周及加强免疫后的第4周可以保护348小鼠单 位/kg(10mg)蝮蛇毒的攻击。免疫的豚鼠在1年半的免疫期内，一般可对抗310小鼠单 位/kg到386. 6小鼠单位/kg蝮蛇毒的攻击(表3-16-17至表3-16-19)。 第二次基础免疫 后 第8周，经386. 6小鼠单位/kg蝮蛇毒攻击后存活半年的豚鼠仍能保护4/5的动物对 月剂量的蝮蛇毒的攻击(表3-16-20)。
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表 3-16-20 |
免疫动物 第一次攻击后6月再次被蝮蛇毒攻击的保护性试验 |
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免疫 |
数量 |
第一次攻击被保护的 |
蝮蛇毒再次 |
7天 |
保护率 |
|
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剂 量 |
攻击剂量 |
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|
动物 |
(只） |
(小白鼠单位/kg) |
(小白鼠单位/kg) |
存活率 |
(%) |
|
豚鼠 |
5 |
386. 6 |
386.6 |
4/5 |
80 |
以上说明了经2次0. 5ml类毒素的基础免疫和1次lml类毒素的加强免疫，可使机 体产生2年的免疫效果。从实际的蝮蛇咬伤的临床看，蝮蛇一次排毒量约10mg。据此分 析，免疫人体对蝮蛇伤的预防有相当的应用价值。该吸附蝮蛇类毒素无局部组织的刺激反 应和全身不良反应，对免疫动物的体重增长、生育功能皆无影响。无热源反应，急性和亚急 性毒性试验中的动物无明显异常，本类毒素在41：保存3年4个月内稳定性好，无毒性逆 转反应，其免疫原性也未明显降低。说明有效期可达3年。虽然此类毒素可引起动物致敏, 但皮下注射不引起过敏反应，是很安全的。该类毒素的理化指标完全符合卫生部生物制品 操作规程关于类毒素的要求标准，也符合日本生物制品操作规程吸附黄绿烙铁头蛇毒类 毒素的法定要求，具有一定的应用前景。
