目前应用较广的并方便基层应用的蛇伤蛇种早期快速诊断法为“天然胶乳凝集抑制法”,具有方法简便、特异性强、迅速、准确率高等优点。整个操作过程只需10分钟左右就能准确诊断出为何种毒蛇咬伤,阳性率达98%以上,为抗蛇毒血清的正确应用带来曙光。
一、“天然胶乳凝集抑制法”原理
用天然胶乳(聚异戊二烯)吸附蛇毒,制成蛇毒天然胶乳抗原,此蛇毒天然胶乳抗原可以和相应的特异性蛇毒抗体发生反应,使胶乳凝集,称为胶乳凝集反应。蛇伤早期患者咬伤局部含有残留蛇毒,若加入相应的蛇毒致敏过的胶乳抗原,胶乳不发生凝集,即为胶乳凝集抑制试验阳性。反之,如果吸出液中无蛇毒或无相应的蛇毒存在时,则胶乳发生凝集为阴性,以此来诊断确定致伤蛇种。
二、使用方法
①先用生理盐水(忌用乙醇、碘酒等)把伤口皮肤冲洗干净,再用消毒刀片或注射针头在伤口上(以牙痕为中心)轻轻划痕(以微出血即可)。如果伤后伤口未闭合者,从牙痕处挤出少许渗出液即可。然后用吸管从伤口上吸取渗出液,以3~5倍之乍理盐水稀释。
②取清洁玻片一块,用红铅笔画成若干格,各格标明不同蛇种名称,将吸出液滴入各格内,每格1滴(约50uL)。
③再分别加入该地区常见的或估计的蛇种诊断I液1滴至相应格内,混合摇动1分钟。
④各格再加入相应的蛇种诊断Ⅱ液l滴,混合摇动5~8分钟。
⑤观察结果:凝集者为阴性,表明吸出液中无该种蛇毒。呈均匀混浊不凝集者为阳性,表明为该种蛇致伤。
三、晚期患者的致伤蛇种诊断
晚期患者的血清用盐水稀释5倍作为检材,检查方法基本同卜。将稀释后的血清l滴分别与各种蛇伤诊断Ⅱ液1滴混合,摇动10分钟后观察结果,凝集者为阳性,不凝集者为阴性。
四、要点
该法快速诊断的时间愈早,准确率愈高。时间长、伤口已无蛇毒时,则阳性率低。一般伤后12小时内阳性率可达99%,24小时左右阳性率降至93~//00,时间愈长,阳性率愈差。
五、注意事项
①该检查液有效期一般为1年,必须4~C~10℃冰箱保存。
②伤口吸出液必须是在伤口未经任何破坏和药物处理之前,如有碘酒、药渣等药水涂抹过伤口,应用生理盐水冲洗后再取吸出液。否则影响检测结果。挤出的液体可适当按1:5稀释后再用于检查。
③玻片必须清洁·I液和Ⅱ液必须同一批号,不可混批使用。
④胶乳如出现自凝,有凝结块,或I液出现混浊,或同批号的T液和Ⅱ液反应不出现凝集时,为诊断液失效,不可使用。
⑤有可能出现假阴性,如早期蛇毒含量过大(特别是眼镜蛇、眼镜王蛇等)可造成胶乳白凝。在病史及局部和全身症状是典型的毒蛇咬伤的情况下,应重新再做一次诊断。这时应将吸出液进一步稀释后再做.
⑥生半夏叶试验:取生半夏叶置嘴中咀嚼,无麻辣味甚至感觉甜味者为毒蛇咬伤。(不得吞下)。
⑥生半夏叶试验:取生半夏叶置嘴中咀嚼,无麻辣味甚至感觉甜味者为毒蛇咬伤。(不得吞下)。
图2—2毒蛇牙痕(左)与无毒蛇牙痕(右)